2019年6月10日，《自然》Nature雜志在線發(fā)表了題為“Off-target RNA mutation induced by DNA base editing and its elimination by mutagenesis”的研究論文，該研究由中科院神經(jīng)科學研究所、腦科學與智能技術卓越創(chuàng)新中心楊輝研究組、四川大學華西二院/生命科學學院郭帆研究組和中國科學院上海營養(yǎng)與健康研究所隸屬的計算生物學研究所（中國科學院-馬普學會計算生物學研究所）李亦學研究組合作完成，該研究發(fā)現(xiàn)DNA單堿基編輯工具CBE和ABE均存在大量的RNA脫靶效應，相比于僅有GFP處理的對照組，CBE或ABE處理的細胞的RNA SNV平均增加了15倍之多。研究者通過一系列分析證明這些RNA脫靶產(chǎn)生的單核苷酸突變與目的編輯位點沒有序列相似性，而主要是由于DNA單堿基編輯器的脫氨酶APOBEC1 (BE3)和TadA (ABE)所導致的。此外，團隊還發(fā)現(xiàn)很高比例的RNA脫靶發(fā)生在癌基因和抑癌基因上，如果用于臨床治療有較大的致癌風險。結合今年3月在《科學》雜志報道單堿基編輯技術BE3存在全基因組范圍內的DNA脫靶效應，該項研究發(fā)現(xiàn)了單堿基編輯工具還存在無法預測的RNA脫靶，加強了世人對單堿基編輯工具的安全性的審視。
為了獲得更加精準的單堿基編輯工具，研究團隊通過引入突變的方法對兩種DNA單堿基編輯器的胞嘧啶脫氨酶和腺嘌呤脫氨酶分別進行了優(yōu)化，最終獲得了3種高保真度的BE3突變體，均能夠完全消除RNA脫靶并維持DNA編輯活性的高精度單堿基編輯工具。針對ABE系統(tǒng)，根據(jù)降低脫氨酶TadA*的RNA結合活性的思路進行點突，在降低RNA脫靶現(xiàn)象的同時維持了其在DNA上的編輯活性。此外，團隊開發(fā)的ABE（F148A）突變體還能夠縮小編輯窗口，實現(xiàn)更加精準的DNA編輯。該技術在特異性和精確性上超越了ABE7.10，結合之前的研究ABE并不造成DNA上的脫靶，該突變體有望在未來成為一種更加安全、更加精準的基因編輯工具，應用于臨床治療中。
上述工作是眾多課題組共同合作的重要成果，得到神經(jīng)所流式分選平臺，巴斯德所流式分選平臺的大力協(xié)助。本工作得到國家高科技研發(fā)項目，中科院戰(zhàn)略性先導科技專項，國家自然科學基金委員會和上海市科學技術委員會等項目的資助。（科技處）
原文鏈接：https://www.nature.com/articles/s41586-019-1314-0
圖注單堿基編輯器BE3中的脫氨酶除了誘導DNA的胞嘧啶脫氨基轉變成T，還能在RNA上造成大范圍的脫靶。
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